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Sin embargo, gran parte de los sistemas de pipeteo han sido diseñados para trabajar con líquidos acuosos a temperatura ambiente. El problema surge cuando las muestras presentan características físicas muy alejadas de este comportamiento ideal.
Líquidos viscosos, espumosos, volátiles, corrosivos, tóxicos o con baja tensión superficial pueden comprometer seriamente la exactitud de una transferencia, generando errores que posteriormente afectan a los resultados analíticos, la reproducibilidad experimental o incluso la seguridad del operario. Según explica Mettler-Toledo Rainin, estos líquidos exigen técnicas y herramientas específicas para garantizar una dosificación fiable.
Gran parte de las pipetas utilizadas habitualmente funcionan mediante desplazamiento de aire. Entre el pistón y el líquido existe una cámara de aire que actúa como elemento de transmisión de presión.
Este diseño funciona correctamente con líquidos similares al agua, pero puede presentar limitaciones cuando cambian las propiedades físicas de la muestra. Variaciones en la presión del aire o la adhesión del líquido a las paredes de la punta pueden provocar desviaciones volumétricas, especialmente en líquidos muy viscosos o muy volátiles.
Por esta razón, el fabricante identifica dos grandes fuentes de error:
Para minimizar estos problemas, la solución considerada más eficaz es la utilización de pipetas de desplazamiento positivo. En este sistema desaparece la cámara de aire intermedia porque el pistón entra en contacto directo con la muestra.
De este modo se eliminan las fluctuaciones de presión y se reduce notablemente la influencia de la viscosidad, la volatilidad o la adhesión del líquido. Según el material técnico de Rainin, esta tecnología constituye la opción más precisa y fiable para trabajar con líquidos difíciles.
La tecnología resulta especialmente útil cuando se manipulan:
Cuando no es posible utilizar una pipeta de desplazamiento positivo, la alternativa recomendada es el denominado "pipeteo inverso".
La técnica consiste en aspirar un volumen superior al requerido, comenzando desde la segunda parada del pistón, para posteriormente dispensar únicamente el volumen deseado y desechar el excedente restante. Este procedimiento ayuda a compensar los efectos de la viscosidad, la espuma o la adhesión del líquido.
El documento identifica seis grandes grupos de muestras que requieren un tratamiento específico:
Líquidos calientes o fríosLas diferencias de temperatura alteran el comportamiento del aire dentro de la pipeta. Para estos casos se recomienda no preenjuagar la punta y evitar reutilizarla.
Las burbujas pueden modificar el volumen real aspirado. La recomendación es evitar la entrada de aire y realizar un pipeteo inverso lento y controlado. Las puntas con filtro ayudan además a proteger la pipeta.
Algunos disolventes orgánicos generan vapores que interfieren en la medición. Para compensarlo se aconseja preenjuagar la punta cinco veces antes del pipeteo y trabajar posteriormente a velocidad constante.
Aceites, soluciones concentradas o determinadas formulaciones farmacéuticas presentan una elevada resistencia al flujo. En estos casos es recomendable emplear pipeteo inverso y puntas de baja retención para minimizar la adhesión.
Algunos detergentes o soluciones especiales muestran una fuerte tendencia a adherirse a las superficies. Las puntas de baja retención contribuyen a mejorar la recuperación de la muestra.
La prioridad pasa a ser la seguridad. Para estas aplicaciones se recomienda utilizar pipeteo directo junto con puntas equipadas con filtro para impedir la contaminación cruzada y proteger los componentes internos de la pipeta.
Uno de los aspectos más interesantes se enfoca también en la selección de la punta.
Entre las soluciones especializadas destacan:
El mensaje de fondo de la propuesta de Mettler-Toledo Rainin es que la calidad del resultado analítico depende tanto de la instrumentación como de la técnica utilizada. Un error en la transferencia de volúmenes puede comprometer ensayos analíticos, procesos de control de calidad, análisis farmacéuticos o experimentos de biología molecular.
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